Farging av utstrykspreparater
av Per M Sandset
—
sist endret
20.07.2008 - 14:01
May-Grünwald-Giemsa-farging
Denne fargemetoden brukes til fiksering og farging av utstrykspreparater (først og fremst blodutstryk og
sternalmarg) for differensialvurdering av celler.
Utstyr
• Metanol (absolutt).
• Fosfatbuffer (pH 6,8).
• May-Grünwalds fargeløsning. Fortynnes 1:1 med buffer før bruk (er da holdbar én dag i værelsestemperatur).
• Giemsas fargeløsning. Fortynnes 1:10 med buffer før bruk (er da holdbar én dag i værelsestemperatur).
Gjennomføring
• 5-15 minutter fiksering i metanol.
• 5 minutter i May-Grünwalds fargevæske.
• 15 minutter i Giemsa´s fargevæske.
• 5 minutter skylling i buffer.
• Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Hurtigmetode
1/2 pipette ufortynnet M-G pådryppes blodutstryket, vente i 1 min., 1/2 pipette fosfatbuffer, alt blandes, vente 3 min., skyll under springen og lufttørk.
Løfflerfarging
Brukes for grovfremstilling av bakterier i utstryk, uten mulighet til å skille gram-positive og -negative. Dette
er enkel og rask metode som ofte brukes i screening før en evt. går videre med Gramfarging.
• Flammefiksering over Bunsenbrenner (trekk objektglasset fort gjennom gassflammen 2 ganger.
• 1/2 minutter i Løffler fargevæske.
• Skyll med springvann.
Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Gramfarging
Brukes til fremstilling av bakterier i utstrykspreparater, først og fremst blodutstryk og spinalvæskepreparater.
Spinalvæske til gramfarging dryppes på et objektglass og røres ut til 50-øres størrelse.
Utstyr
• Bunsenbrenner, objektglass, springvann.
• Gram I og Gram II fargevæske.
• Etanol 96% (Gram III).
• Safranin 10% (Gram IV)
Gjennomføring
• Flammefiksering over Bunsenbrenner.
• 1/2 – 1 minutter i Gram I (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• 1 minutt i Gram II (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• 2 minutter avfarging med 96% etanol (Gram III) – til intet fargestoff løsner.
• Skyll med springvann.
• 1/2 minutt med safranin (Gram IV) (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Typiske funn
• Gram-positive mikrober (blå): Pneumokokker, stafylokokker.
• Gram-negative mikrober (røde): Meningokokker, E. coli, Haemophilus influenzae, Proteus.
Denne fargemetoden brukes til fiksering og farging av utstrykspreparater (først og fremst blodutstryk og
sternalmarg) for differensialvurdering av celler.
Utstyr
• Metanol (absolutt).
• Fosfatbuffer (pH 6,8).
• May-Grünwalds fargeløsning. Fortynnes 1:1 med buffer før bruk (er da holdbar én dag i værelsestemperatur).
• Giemsas fargeløsning. Fortynnes 1:10 med buffer før bruk (er da holdbar én dag i værelsestemperatur).
Gjennomføring
• 5-15 minutter fiksering i metanol.
• 5 minutter i May-Grünwalds fargevæske.
• 15 minutter i Giemsa´s fargevæske.
• 5 minutter skylling i buffer.
• Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Hurtigmetode
1/2 pipette ufortynnet M-G pådryppes blodutstryket, vente i 1 min., 1/2 pipette fosfatbuffer, alt blandes, vente 3 min., skyll under springen og lufttørk.
Løfflerfarging
Brukes for grovfremstilling av bakterier i utstryk, uten mulighet til å skille gram-positive og -negative. Dette
er enkel og rask metode som ofte brukes i screening før en evt. går videre med Gramfarging.
• Flammefiksering over Bunsenbrenner (trekk objektglasset fort gjennom gassflammen 2 ganger.
• 1/2 minutter i Løffler fargevæske.
• Skyll med springvann.
Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Gramfarging
Brukes til fremstilling av bakterier i utstrykspreparater, først og fremst blodutstryk og spinalvæskepreparater.
Spinalvæske til gramfarging dryppes på et objektglass og røres ut til 50-øres størrelse.
Utstyr
• Bunsenbrenner, objektglass, springvann.
• Gram I og Gram II fargevæske.
• Etanol 96% (Gram III).
• Safranin 10% (Gram IV)
Gjennomføring
• Flammefiksering over Bunsenbrenner.
• 1/2 – 1 minutter i Gram I (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• 1 minutt i Gram II (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• 2 minutter avfarging med 96% etanol (Gram III) – til intet fargestoff løsner.
• Skyll med springvann.
• 1/2 minutt med safranin (Gram IV) (filtreres før bruk). Hell av og skyll med springvann.
• Lufttørke i romtemperatur – vertikalstillet objektglass.
Typiske funn
• Gram-positive mikrober (blå): Pneumokokker, stafylokokker.
• Gram-negative mikrober (røde): Meningokokker, E. coli, Haemophilus influenzae, Proteus.
